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D-虫荧光素（D-Luciferin）是萤火虫荧光素酶底物。其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。反应原理：首先，在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应，接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物活体成像系统配套使用，用于标记LUC基因后的体内活体荧光检测。激发和发射波长分别为328nm和533nm。

• 活体成像分析方法
  
  • 用DPBS(w/o Mg²⁺、Ca²⁺)完全溶解D-Luciferin工作液(15mg/mL，超声助溶)，0.2μm滤膜无菌过滤。
    
  • 注射量：10μL/g的体重，如10g重小鼠，注射100μL工作液(1.5mg D-Luciferin)。
    
  • 腹腔注射10～15分钟后，上机进行图像分析。
• 体外分析方法
  
  • 用无菌水配制200×的D-Luciferin储备液(30mg/mL，超声助溶)，立即使用，或-20℃保存。
    
  • 用预热好的完全培养基1∶200稀释D-Luciferin储备液，配制工作液(150μg/mL)。
    
  • 去除培养细胞的培养基。
    
  • 进行图像分析前，向细胞中添加1×的D-Luciferin工作液，进行图像分析。
    
    • 在图像分析前，将细胞进行37℃的短时间培养可以增加信号强度。